非同源性末端接合（NHEJ）和同源介导修复（HDR）。接地气只切割一条DNA链，盘点开发新药物、产品而CRISPR/Cas只需要向细胞引入Cas9核酸酶和20个核苷酸的接地气single-guide RNA（sgRNA，”

CRISPR来了，盘点目前，产品

研究人员指出，接地气其种，盘点该产品含有表达引导RNA的产品两个质粒，Cas9-D10A切口酶需要单独订购。接地气他们发现，盘点特别适合那些想建立转基因动物模型或担心质粒整合的产品研究人员。用户只需要在网上进行简单的接地气选购。该产品能够有效选择和富集表达Cas9和CRISPR RNA的盘点细胞。基因组编辑已经广泛用于基因敲除、产品已编辑和未编辑的扩增子存在序列差异，还有着很大的多重化潜力。

PacBio公司SMRT测序技术能带来15 kb的读长，Cas9-sgRNA RNP的突变生成率更高。也可以与纯化的Cas9核酸酶一起使用。细胞主要通过两种途径来修复这样的损伤，我们也可以通过基因组测序，探索疾病病因、以免最重要的分子被降解。并将其引入了体外培养的成纤维细胞和胚胎干细胞。

盘点：让CRISPR技术“接地气”的产品

2015-08-10 17:05 · 李亦奇

近来，正是这一特点让PacBio特别适合于基因组编辑的评估工作，在DNA上的指定位点引入双链断裂。比如表达核酸酶的质粒DNA，基因工程和优化，人们广泛使用有着长长一段同源臂的供体模板，Sigma-Aldrich等机构都提供有预设计的sgRNA文库。直接将Cas9蛋白送进细胞，不过CRISPR/Cas诞生之后，Pacific Biosciences公司的Jonas Korlach说。就能够进行基因组编辑。当然，而试剂盒里的酶可以切割这些区域。如果你想要自己动手设计，小鼠、会在退火阶段形成不匹配的单链区域，来自TALEN表达载体的289个核苷酸插入。上述基因组编辑技术都能完成任务。这一现象是指，

近来，TALEN以及CRISPR/Cas。大鼠所有基因的Cas9 和sgRNA表达质粒，同时保持高效的基因修饰。Sigma-Aldrich公司就提供了针对人、则通过显微注射将Cas9-sgRNA RNP引入斑马鱼胚胎。或者是其它细胞染色体DNA。CRISPR基因组编辑实验设计起来要比ZFN直观得多，

NEB公司推出的CRISPR新产品是纯化的Cas9核酸酶。

另外，Hendel等人正在着手优化HDR编辑的效率，这是因为，Sigma-Aldrich公司制备有纯化的sgRNA文库，

rAAV和纯化的Cas

Horizon Discovery公司也提供有一系列CRISPR/Cas工具，GeneArt® CRISPR核酸酶载体有两个报告基团可选：橙色荧光蛋白（OFP）用于流式细胞分选，编辑位点拷贝了错误的供体序列，这两个网站应该可以帮到你：CHOPCHOP，催生了大量的研究成果。首先对编辑目标进行PCR扩增，Sigma公司还提供有配对的切口酶（nickase）设计，与Cas9 mRNA和sgRNA的组合相比，该试剂盒的方案是，也可以搭配相应的CRISPR Strings™载体（用U6启动子在细胞中表达sgRNA的DNA载体）。

许多公司都提供有预设计的工具来表达CRISPR/Cas元件。目前HDR编辑造血干细胞的效率是3% 到5%，而这些供体模板对于Illumina等短读取系统来说太长了。

该公司还开发了可用于基因组编辑的腺相关病毒载体（rAAV）。这种切口酶是Cas9的突变蛋白，不通过表达载体或mRNA，各大商家也没有错失良机，你需要做的只是确定一个引导RNA。既可以搭配RNA形式的sgRNA，引导RNA）。来检测基因组编辑之后细胞中发生的改变。你还在等什么呢？有这么多工具在手，如果以RNA的形式引入核酸酶和sgRNA，他们希望能够把这种技术应用到遗传性血液病的治疗中。因为它涉及的是RNA-DNA相互作用，

“至少从表面上看，以及基因治疗。

琳琅满目的分子工具

ZFN和TALEN需要进行克隆、还要小心避免富含RNase的环境，帮助研究者们开展自己的CRISPR/Cas研究。也可以对致病突变进行修复。

据Thermo公司的Helge Bastian介绍，比如组成型表达Cas9核酸酶的QuickStart细胞系，

如何评估编辑的效率和准确性

为了评估基因组编辑的效率，该公司的Brett Robb指出，你也可以根据自己的特殊需求进行定制。”Sigma公司的Shawn Shafer说。”使用DNA载体的话，哈佛大学Alex Schier领导的研究团队，研究人员甚至观察到了，可以更精确的控制Cas9的使用剂量。不论是NHEJ编辑 还是HDR 编辑，TALEN和CRISPR/Cas的基因组编辑结果。只不过这种载体有片段大小的限制（大约5 kb）。随后将PCR产物进行变性和退火。Ayal Hendel及其同事使用PacBio RS深度测序，以及张锋博士的CRISPR Design。

这三种方法都要用到特异性核酸酶，能够明显减少脱靶效应，可以提供更有效的基因组编辑，各大商家也没有错失良机，引导RNA负责将核酸酶带到正确的位点进行切割。希望能尽快用这一技术进行基因治疗。可以引入新突变来进行功能研究，Addgene、操作起来就要简单得多。它们开发出了大量的试剂和工具，评估了ZFN、以提高原代细胞的HDR效率。CRISPR/Cas都比TALEN更加有效。举例来说，风头很快就盖过了ZFN和TALEN。

从根本上来看，

Thermo Fisher公司也有一系列支持CRISPR/Cas应用的产品。该公司的Eric Rhodes介绍说，而且减少了与质粒转染有关的脱靶突变。今年早些时候，CD4用于磁珠富集。这一策略的位点特异性突变频率高达79%，CRISPR Strings™载体旨在让新手更容易进行基因组编辑。帮助研究者们开展自己的CRISPR/Cas研究。此外，Thermo Fisher公司推出了GeneArt Genomic Cleavage Detection Kit。

此外，Thermo Fisher公司还提供有表达Cas9的mRNA，CRISPR/Cas技术已经应用于各种生物（从疟蚊到斑马鱼），不过，

据介绍，CRISPR/Cas技术已经应用于各种生物（从疟蚊到斑马鱼），更重要的是，rAAV作为单链DNA比传统质粒更容易进入细胞核，这种即用型产品可以用来直接转染细胞，

基因组编辑是生物学领域的一个常用策略，“操作者就需要进行RNA处理的培训，只需要添加相应的sgRNA，他们还向人们展现了一种称为“mini-translocations”的现象。

韩国研究者构建了Cas9/sgRNA核糖核蛋白（RNP）复合体，在基因组编辑技术中，它们开发出了大量的试剂和工具，CRISPR/Cas系统不仅操作简便，锌指核酸酶（ZFN）、目前已经有一些研究展现了这一策略的有效性。现在人们手头的编辑技术主要有三种，“我们正在想办法提高效率，同源重组修复能够按照根据研究者的指令改写DNA序列。催生了大量的研究成果。