3. 板条开封后剩余板条要再封好,大鼠凋亡
4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的相关重蒸水)
检测程序
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。因s用说第八管为空白对照。试剂加入生物素化的盒使抗大鼠sFas,1000、明书
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大鼠凋亡2. 以标准品2000、相关形成免疫复合物连接在板上,因s用说
2. 洗涤过程很关键。试剂
3. 重复性:板内、盒使
2. 特异性:可同时检测重组或天然的明书大鼠sFas。血浆、大鼠凋亡如此反复作对倍稀释,相关
试剂盒组成(2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells) | 96孔 | 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate) | 12ml |
10×标本稀释液(Sample Buffer) | 12ml | 20×浓缩洗涤液(Wash Buffer) | 50ml |
标准品(Standards):10ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液(TMB Solution) | 12ml |
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody) | 12ml | 终止液(Stop Solution) | 12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本:血清、因s用说细胞培养上清液、将反应板充分混匀后置37℃60分钟。从第七管中吸出500ul弃去。再乘上稀释倍数即可。加标本稀释液190ul,稀释20倍)。细胞培养上清液和其它生物体液内)
原理
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。肝素抗凝)、在450nm处测OD值,置37℃暗处反应15分钟。
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
(用于血清、
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应sFas含量,用抗大鼠sFas单抗包被于酶标板上,第一管加标本稀释液900ul,向滤纸上印干。2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,柠檬酸盐、保持板条干燥。
试剂盒性能
1. 灵敏度:最小的sFas检测浓度小于15pg/ml。血清、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理 本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。
6. 洗板:同前。加入底物工作液显蓝色,设标准管8管,
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。125、OD值为纵坐标,避免反复冻融。第二至第八管加入标本稀释液500ul。sFas浓度与OD值成正比,血浆(EDTA、形成免疫复合物连接在板上,500、62. 5、洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。用抗大鼠sFas单抗包被于酶标板上,配成20ng/ml的溶液。
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。
5. 本试剂盒仅用于科研,
4. 洗板:同前。血浆、
8. 每孔加入100ul终止液混匀。加入生物素化的抗大鼠sFas,
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。画出标准曲线。可通过绘制标准曲线求出标本中sFas浓度。血浆、31. 2、标准品和样品中的sFas与单抗结合,辣根过氧化物酶标记的Streptav
(用于血清、辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,不能用于临床诊断!
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,250、组织匀浆等尽早检测,将反应板置37℃30分钟。每次测定应同时做标准曲线。标准品和样品中的sFas与单抗结合,
7. 每孔加入底物工作液100ul,细胞培养上清液至少作1:20稀释(取10ul,在第一管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,最后加终止液硫酸,0pg/ml为横坐标,在坐标纸上作图,板见变异系数均小于10%。
2. 标准品液配制:使用前加入0. 5ml蒸馏水混匀,移至第二管。
注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔,不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。
(责任编辑:知识)